I lavori di costruzione della biblioteca vennero iniziati, su volere di Giulio de Medici che affidò il progetto a Michelangelo, nel 1524 ma vennero portati a termine solamente nel 1571 da Cosimo de Medici. Di particolare bellezza è lo scalone progettato da Michelangelo in legno ma realizzato in pietra serena su volontà di Cosimo I. Il vestibolo, di forma quadrata, è occupato quasi interamente dallo scalone e si sviluppa in altezza per dare luce alla sala di lettura della biblioteca. Di notevole bellezza gli arredi della sala di lettura e le fvetrate disegnate dal Vasari. La biblioteca rappresenta una delle più vaste collezioni al mondo di manoscritti e conserva circa 68.000 volumi a stampa, 11.000 manoscritti, 406 incunaboli oltre che papiri egizi.

Alla biblioteca sono ammesse solamente persone che dimostrino di portare avanti studi o ricerche scientifiche.
Persone diversamente abili: la biblioteca non dispone di ascensore e di servizi igienici adatti a persone su sedia a ruote.
Ubicazione. Piazza San Lorenzo, 9